材料

• 磷酸鹽緩沖液（PBS）
• 胎牛血清
• PerFix-nc 試劑 1、2 和 3（型號： B10825）
• 磷酸鹽緩沖液（PBS）含 0.5% 甲醛

步驟

1. 調整細胞濃度為 5 x 10⁶/mL，每次測試使用 100 μL（每個測試 5 x 10⁵ 個細胞）
2. 添加 2.5 uL 的 ViaKrome 可固定活性染料
3. 震盪混合細胞
4. 在 18-25°C 下避光反應 20 分鐘
5. 添加 3 mL 的磷酸鹽緩沖液（PBS） 1X
6. 在 300 g 下離心 5 分鐘
7. 去除上清液
8. 加入 500 μL 的磷酸鹽緩沖液（PBS） 1X / 甲醛 0.5%
9. 使用流式細胞儀收集數據

*對於與其他方法和/或樣品一起使用，建議對 ViaKrome 可固定活性染料進行濃度滴定實驗，以確定最佳劑量。

使用 ViaKrome 可固定活性染料進行細胞表面染色

未經處理（活細胞）和染色的Jurkat細胞（死細胞）混合在一起使用流式細胞儀進行檢測，結果用的雙參數表示（側向散射光強度與螢光強度）。使用 CytoFLEX LX N-V-B-Y-R-I 系列流式細胞儀進行數據收集，並通過特定的帶通濾片偵測放射光訊號。ViaKrome 405 Dye 使用紫光雷射 （405 nm）激發，試劑組 A、ViaKrome 561 Dye 由黃綠色雷射 （561 nm）激發、試劑組B、ViaKrome 638 Dye 由紅色雷射 （638 nm）激發、試劑組C 和 ViaKrome 808 由遠紅外光雷射 （808 nm）同時激發、試劑組 D。

周邊血液單核細胞 (PBMCs)

1. 在 50 μL 細胞濃度為107 /mL周邊血液單核細胞(PBMCs)中，加入 2.5 μL的 ViaKrome 可固定活性染料。
2. 震盪混合細胞
3. 在18-25°C下避光反應20分鐘
4. 添加 3 mL PBS 1X
5. 150 g 離心5分鐘，吸除上清液
6. 加入50 μL胎牛血清，震盪混合細胞，直至顆粒分離
7. 繼續進行細胞內染色

*對於與染色流程/或樣品一起使用，建議對 ViaKrome 可固定活性染料進行濃度滴定實驗，以確定最佳劑量。

使用 ViaKrome 可固定活性染料進行細胞表面染色

周邊血液單核細胞（PMBC）染色後使用流式細胞儀進行檢測，結果用的雙參數表示（側向散射光強度與螢光強度）。使用 CytoFLEX LX N-V-B-Y-R-I 系列流式細胞儀進行數據收集，並通過特定的帶通濾波器偵測。ViaKrome 405 Dye 使用紫光雷射 （405 nm）激發，試劑組 A、ViaKrome 561 Dye 由黃綠色雷射 （561 nm）激發、試劑組 B，ViaKrome 638 Dye 由紅色雷射 （638 nm）激發、試劑組 C 以及 ViaKrome 808 由紅外光雷射 （808 nm）激發、試劑組 D 。