細胞類型指南和優化

BLU includes 7 system cell types:
- BCI Default – general use
- Mammalian - CHO, HEK, PBMC
- Insect – SF-9, SF-21
- Yeast- biofuel, breweries, fermentation applications
- BCI Viab Beads – for use with BLU viability control
- BCI Conc Beads – for use with BLU concentration controls
- BCI L10 Beads – for use with L10 (10um) size standard
對於許多細胞類型,軟體中提供的默認細胞類型值即適用。對於某些細胞 系,需要更改參數,以優化對細胞的分析。
Migrating cell types from XR to BLU
Suggested conversion values. Please contact your Beckman Coulter Life Sciences representative for more assistance.
| XR Setting | BLU Setting Starting Value | |
|---|---|---|
| Min | Same | -1 um |
| Max | Same | -1 um |
| Images | 50 | 50 or 100 |
| Aspirate | Same | 3 |
| Mix | Same | 3 |
| Cell Brightness | 85 | N/A |
| Cell Sharpness | 100 | 7 |
| 80 | 15 | |
| 60 | 20 | |
| Viable Spot Brightness | 85 | 55 |
| 75 | 50 | |
| 65 | 40 | |
| Viable Spot Area | Same | Same |
| Min Circularity | Same | Same |
| Decluster | Same | Same |
| 細胞類型參數 | 典型範圍 | 全範圍 | 增加值 | 減小值 | 需要更改此值的情況/原因 | 警告 | |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
|
定義是否存在細胞 |
Minimum Diameter(最小直徑) |
5 到 12µm |
1 到 60 µm |
識別的細胞減少 |
識別的細胞增多 |
軟體要排除小細胞(藍色圓形) 分析中包含的碎片 |
過低,可能包含碎片 過高,已排除細胞 |
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Maximum Diameter(最大直徑) |
15 到 50 µm |
1 到 60 µm |
識別的細胞增多 |
識別的細胞減少 |
軟體要排除大細胞(藍色圓形) 已包括細胞凝塊 |
過低,可能排除細胞 包括細胞凝塊 |
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Cell Sharpness(細胞清晰度) |
5 到 25 |
0 到 100 |
識別的細胞減少 |
識別的細胞增多 |
軟體要排除“模糊”細胞 已挑選出不需要的碎片 |
設置過高可能會導致排除死細胞並改變存活率。 |
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定義識別的細胞是活細胞還是死細胞 |
Viable Cell Spot Brightness(活細胞斑點亮度) |
40 至 60% |
0 至 95% |
將更多細胞識別為死細胞 |
將更多細胞識別為活細胞 |
活細胞被識別為死細胞 死細胞被識別為活細胞 |
過低,可能開始將死細胞識別為活細胞 過高,可能開始將活細胞識別為死細胞 |
|
Viable Cell Spot Area(活細胞斑點區域) |
3 至 12% |
0 to 95% |
將更多細胞識別為死細胞 |
將更多細胞識別為活細胞 |
活細胞被識別為死細胞 死細胞被識別為活細胞 |
過低,可能開始將死細胞識別為活細胞 過高,可能開始將活細胞識別為死細胞 |
|
|
定義是否存在細胞 |
Minimum Circularity(最小圓度) |
0 至 0.60 |
0 至 1.00 |
將排除更多不規則形狀死細胞 |
將排除更少不規則形狀死細胞 |
會挑選出不需要的不規則形狀碎片 |
過低,可能會捕獲不需要的碎片 過高,可能開始排除細胞 |
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Decluster Degree(去簇度) |
None(無)、Low(低)到 Medium(中) |
不適用 |
識別的細胞增多 |
識別的細胞減少 |
會遺漏簇群中的細胞 單個細胞被識別為 2 個或更多個細胞 |
過低,可能會遺漏簇群中的細胞 過高,可能會將單個細胞注釋為 2 個或多個細胞而予以過度去簇 |
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Cell Sharpness(細胞清晰度) |
Cell Sharpness(細胞清晰度)是細胞邊緣的度量值(在 0-100 范圍之間)。降低該值,可以將更為模糊的對象識別為細胞。提高清晰度,可以在細胞計數時排除較為模糊的細胞。 |
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| Viable Cell Spot Brightness(活細胞斑點亮度) |
Viable Cell Spot Brightness(活細胞斑點亮度)測量細胞中心的亮度,以確定細胞有無活性(綠色或紅色注釋)。如使用較高值,則將中心為亮白色的細胞計數為活細胞(存活率會降低)。如使用較低值,則將中心為灰色的細胞計數為活細胞(存活率會升高)。必須檢查注釋,以確定 Viable Cell Spot Brightness(活細胞斑點亮度)的設置是否正確,這至關重要。 |
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Viable Cell Spot Area(活細胞斑點區域) |
Viable Cell Spot Area(活細胞斑點區域)是細胞白色區域的百分比,用於確定細胞有無活性。如該值過高,會導致將某些活細胞計數為死細胞。一般來說,無需調整此參數。 |
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Minimum Circularity(最小圓度) |
此參數用於排除碎片。假設“1”是完美圓形。 |
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Decluster Degree(去簇度) |
去簇度定義將細胞簇群去簇的密度。None(無)是指不將任何細胞簇群去簇 - 適用於細胞非常長且不包含細胞簇群的樣本。Low(低)適用於 2-3 個細胞結成簇群的樣本。Medium(中)適用於一些由 3 個以上細胞結成簇群的樣本。High(高)適用於酵母細胞。 |
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