所有可固定活性染料染色均基於 NHS 酯活性基團與蛋白質上面一級胺的交聯反應。 染色過程中，存在著水解反應平衡與交聯反應平衡，當反應平衡偏向於水解，便會降低標記反應的效率。 這種水解反應與 pH，溫度相關。 活性基團的半衰期在 pH8.6，4 °C 的環境下可短至 10 分鐘。 這意味著，在水溶液中，染劑在短時間內呈現惰性，染色效率下降。

此外，原液中的水蒸氣含量會影響試劑性能，染色效率下降。當染色效率下降，便檢測不到真正的死細胞。因此，試劑通常以 DMSO 復溶，儲存在 -80°C，並以少量分裝，供一次性使用。 染色過程需要嚴格計時，以便獲得一致的結果。

ViaKrome可固定活性染料不基於 NHS 酯活性基團。 該類化學基團不受水解影響，在標準化測定程序中具有更好的穩定性。

2 小時和 24 小時染色後的檢測結果

Jurkat 細胞和熱應力（55°C10分鐘）的混合物，Jurkat 細胞被染色通過 ViaKrome 可固定活性染料。 在 2 小時（n = 4）或 24 小時（n = 3）染色後立即採集樣本。 記錄死細胞群（佔時間零的百分比）。 錯誤條表示跨複製的平均變異。 在 2 小時後染色的樣本採集比率為 98-100%（時間為 0 時），24小時後染色的樣本採集比率為 91-103%。